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Preparação de cortes do hipocampo agudo a partir de camundongos e ratos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas durante envelhecimento e patologia amiloide

Resumo

A preparação do corte do hipocampo do roedor é talvez a ferramenta mais amplamente utilizada para a investigação da função sináptica e plasticidade de mamíferos. O hipocampo pode ser extraído de forma rápida e fácil de ratos e camundongos e os cortes permanecem viáveis por horas em fluído cérebro-espinhal artificial oxigenado.

Além do mais, técnicas eletrofisiológicas são facilmente aplicadas à investigação da função sináptica em cortes do hipocampo e têm fornecido algumas das melhores bio-marcações para distúrbios cognitivos. O corte do hipocampo é especialmente popular para o estudo de mecanismos de plasticidade sinápticos envolvidos no aprendizado e na memória. Alterações à indução de potenciação e depressão de longo prazo (LTP e LTD) de eficácia sináptica em cortes do hipocampo (ou falta dos mesmos) são usadas com frequência para descrever fenótipo neurológico de animais com debilidade cognitivas e/ou para avaliar o mecanismo de ação de compostos nootrópicos. Este artigo descreve os procedimento que usamos para preparar cortes do hipocampo de camundongos e ratos transgênicos para o estudo de alterações sinápticas associadas com o envelhecimento cerebral e a doença de Alzheimer (AD)1-3.

O uso de camundongos envelhecidos e ratos do modelo AD pode apresentar um conjunto único de desafios para os pesquisadores acostumados a usar camundongos e/ou ratos mais jovens em suas pesquisas. Ratos envelhecidos possuem crânios mais espessos e tecido conectivo mais rígido do que camundongos e ratos mais jovens, o que pode atrasar a extração do cérebro e/ou dissecação e, consequentemente, negar ou exagerar diferenças de idade real na função sináptica e na plasticidade. Patologia de envelhecimento e amiloide podem também exacerbar o dano ao hipocampo sustentando durante o procedimento de dissecação, complicando novamente quaisquer inferências à partir da avaliação fisiológica. Aqui discutimos as etapas adotadas durante o procedimento de dissecação para minimizar estes problemas.

Exemplos de respostas sinápticas adquiridas em cortes "saudáveis" e "não saudáveis" a partir de camundongos e ratos são fornecidos, assim como os experimentos de plasticidade sináptica representativos. O possível impacto do outros fatores metodológicos na função sináptica nestes modelos de animais (por exemplo, componentes de solução de registros, parâmetros de estímulo) também são discutidos. Embora o foco deste artigo seja na utilização de camundongos envelhecidos e ratos transgênicos, novatos em cortes fisiológicos devem encontrar aqui detalhes suficientes para iniciarem seus próprios estudos, utilizando uma variedade de modelos de roedores.

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