Skip to main content

Registro "patch-clamp" en cortes de cerebro con tecnología de cortador mejorada

J. R. P. Geiger · J. Bischofberger · I. Vida · U. Fröbe S. Pfitzinger · H. J. Weber · K. Haverkampf · P. Jonas

El uso de técnicas avanzadas de registro "patch clamp" en cortes de cerebro, tal como registro simultáneo de múltiples neuronas y registro de dendritas o terminales presinápticas, cortes a demanda de la máxima calidad.

En este contexto, la mecánica del cortador de tejidos es un factor importante. Idealmente, un cortador de tejido debe generar movimientos de frecuencia alta y gran amplitud de la cuchilla de corte en un eje horizontal, con vibraciones mínimas en el eje vertical.

Hemos desarrollado un vibrocortador que cumple estos requisitos en parte conflictivos. El oscilador es un sistema de resorte de hoja-bobina-imán permanente. Utilizando un circuito de alimentación mecanoeléctrico autorresonante, se generan oscilaciones horizontales grandes (hasta 3 mm pico-a-pico) con frecuencia alta (ca. 90 Hz). Para minimizar las vibraciones verticales, se utilizó un mecanismo de ajuste que permitió la alineación del borde cortante de la cuchilla con el eje principal de la oscilación.

Se utilizó un dispositivo vibrosonda para monitorizar las vibraciones verticales durante el ajuste. El sistema se basa en la sombra de la trayectoria de la luz entre un diodo fotoemisor (LED) y un fotodiodo. La monitorización de la vibrosonda reveló que el vibrocortador, después del ajuste adecuado, generó vibraciones verticales de <1 µm, significativamente menor que muchos cortadores de tejido comerciales.

El análisis por microscopía óptica y electrónica de las capas superficiales de los cortes realizados con el vibrocortador mostraron que los elementos celulares, los procesos dendríticos y los terminales presinápticos se conservan bien bajo estas condiciones, según lo requerido para el registro "patch-clamp" de estas estructuras.

<media 18940 - download>Descargar el pdf completo</media>